你还在为细胞转染稳定性差、原代细胞转染效率低、以及敏感细胞转染后存活率低而苦恼吗？
Lonza的Nucleofector(TM)转染技术将会为你扫清障碍，实现稳定且低毒性的高效转染。
你还在为批量筛选关键基因和靶点劳神费力吗？
Lonza最新一代的4D-Nucleofector(TM) Technology以及384-well Nucleofector(TM)将会解放你的双手，在几分钟内帮你实现96乃至384个通量的高效转染和筛选。
Nucleofector(TM)技术是一种基于通过施加电脉冲在细胞膜中瞬间产生小孔，综合各种Nucleofector(TM)程序和细胞类型特异性电转试剂，使核酸底物输送到细胞质，甚至可以通过核膜进入细胞核，使得细胞最高转染效率可达99%，并使转染效率不依赖于细胞的增殖分裂。最新升级的4D-Nucleofector(TM) Technology和384-well Nucleofector(TM)更是集多种转染方式于一身，具有强大兼容性和高通量性，全面满足各种转染需求。
4D-Nucleofector(TM) Technology系统是一种4位一体的模块化系统，其最基本的功能模块包括Core模块、X模块-悬浮转染模块，同时可根据自身需求灵活叠加Y模块-贴壁转染模块、96孔-中通量转染模块、以及LV模块-大规模转染模块。
其中，X模块可利用2个100μl电极杯和20μl 16孔板条快速转染104-107个悬浮细胞。Y模块可以实现贴壁细胞的直接转染，有效克服敏感细胞的转染障碍，更好的保护细胞功能。96孔模块可以为一系列原代细胞和细胞系提供灵活的通量，作为有效的筛选工具。同时，每块板最多可运行96个独立程序，在5分钟内自动处理，适用于便捷地优化核转染条件。LV模块则依赖其封闭系统，大容量核流动性等特点实现大规模转染，为CAR-T等细胞疗法提供了有力的技术保障。
384-well Nucleofector(TM)系统是一个独立的平台，由产生高压脉冲的电源单，带有电动转盘的板处理单元，和直观的基于PC的操作软件组成，可轻松对384-well Nucleofection实验进行参数设置，实现384孔的高通量核转染。该平台可在一分钟内处理384个孔，转染细胞量可低至2x104个细胞，并且384孔中的每一个都可以独立进行条件设置，是筛选应用的绝佳工具。
用数据说话
自2001年上市起，Lonza Nucleofector(TM)已有二十多年历史，不断优化升级的Nucleofector(TM)技术受到了客户的广泛认可。据不完全统计，借力Lonza Nucleofector(TM)的文章多达数万篇，其中不乏发表于Nature,Science,Cell,Nature medicine,Nature cell biology,Cell stem cell等高水平期刊的佳作。应用Nucleofector(TM)技术转染的细胞类型包括人源NK细胞，T细胞、iPSC、B细胞，鼠源T细胞、肝细胞、内皮细胞、成纤维细胞、肌肉干细胞等数百种细胞类型。此外，Lonza全球开放并长期更新的数据库 (https://knowledge.lonza.com/)更是包含了超700种细胞类型的转染信息，并为上百种常用细胞类型提供详细的实验方案。
用案例举证
新一代的96孔和384孔的Nucleofector(TM)系统，更是为中高通量筛选提供了革命性的技术支撑。中高通量的技术平台为探究发育、疾病、肿瘤、病毒侵染等发生发展，筛选不同生物进程中的关键调控因子，以及药物靶点的筛查等生命科学的关键领域创造了无限可能。
案例一 2020年，美国加州大学Nevan J. Krogan团队联合来自英国，法国和德国的科学家在顶级学术研究型期刊Science上发表了题为 "Comparative host-coronavirus protein interaction networks reveal pan-viral disease mechanisms"利用Lonza的转染试剂SF Buffer(Lonza V5SC-2002)和Lonza的HT 384-well nucleofector(Lonza, #AAU-1001)并结合 CRISPR 基因敲除系统在Caco-2细胞中成功筛选出SARS-CoV-2侵染宿主细胞并在宿主细胞中互作而得以存活的因子[1]。为解密SARS-CoV如何侵染宿主细胞提供了重要依据，同时为防治和治疗SARS-CoV提供了坚实的理论基础。 案例二 同年，来自丹麦哥本哈根大学的Petra Hamerlik团队在高水平期刊Nature communication上发表了题为"SPT6-driven error-free DNA repair safeguards genomic stability of glioblastoma cancer stem-like cells"应用384-well Nucleofector(TM)系统和P3 Nucleofector(TM) Solution(Lonza)转染试剂在胶质母细胞瘤干细胞样细胞系(Glioblastoma cancer stem-like cells: GBM)中进行了多达296个基因的siRNA干扰实验，在数百个调控染色体结构的基因中筛查出SPT6是GBM中基因组稳定性的重要调节因子[2]。 案例三 肝脏纤维化是肝硬化等疾病发生发展过程中的一个重要环节，因此，探究肝脏纤维化的形成机制至关重要。2022年，Takeda Development Center的Shan Yu团队在ACS Chem. Biol.上发表了题为 "Genome-wide CRISPR Screening to Identify Drivers of TGF-β Induced Liver Fibrosis in Human Hepatic Stellate Cells"，主要应用了Lonza的Nucleofector(TM)技术，分别使用了Nucleofector(TM) X模块和384-well Nucleofector(TM)，在人源的肝脏星状细胞中转染CRISPR系统，筛选出了多个介导TGF- β信号通路调控纤维化进程的因子[3]。 案例四2023年，阿斯利康旗下的科学家Davide Gianni等人在SLAS Discovery上发表了题为 "Highly scalable arrayed CRISPR mediated gene silencing in primary lung small airway epithelial cells"的研究性和实验方法类文章，利用Lonza的Nucleofector(TM) 高通量转染技术探究原代肺小气道上皮细胞中疾病相关基因[4]。该文章介绍了传统脂质体转染方式在原代细胞中的转染难度之大，大规模筛选之不便捷，同时详细介绍了如何使用和优化高通量Nucleofector(TM) 技术，便捷高效的实现科研目的。
可见，Nucleofector(TM) Technology是全方位满足各种转染需求的利器，是科研工作者转染无忧、高效筛选的重要法宝。此外，Lonza团队为了更好地服务中国用户，建立了集产品资料、应用教学以及最新资讯为一体的微信服务平台(Lonza Bioscience)，助力广大中国科研工作者进一步探究生命科学奥秘。
主题
Arrayed CRISPR screening for phenotypic discovery at the MRC-AstraZeneca-University of Cambridge Joint Functional Genomics Screening Laboratory (FGSL)
内容
●CRISPR screening as an unbiased approach to identify new targets for hypothesis generation.
●Arrayed format facilitates dissection of complex phenotypes.
●Non-viral delivery of CRISPR/Cas9 reagents such as through nucleofection enables arrayed screening in primary cells.
演讲者
[参考文献]
1.Gordon, D.E., et al., Comparative host-coronavirus protein interaction networks reveal pan-viral disease mechanisms. Science, 2020. 370(6521). 2.Obara, E.A.A., et al., SPT6-driven error-free DNA repair safeguards genomic stability of glioblastoma cancer stem-like cells. Nat Commun, 2020. 11(1): p. 4709. 3.Yu, S., et al., Genome-wide CRISPR Screening to Identify Drivers of TGF-beta-Induced Liver Fibrosis in Human Hepatic Stellate Cells. ACS Chem Biol, 2022. 17(4): p. 918-929. 4.Dickson, A., et al., Highly scalable arrayed CRISPR mediated gene silencing in primary lung small airway epithelial cells. SLAS Discov, 2023. 28(2): p. 29-35. Lonza Bioscience技术支持公共邮箱已开通， 如果您在产品使用的过程中遇到任何问题， 请发送至 techsupport.bioscience.china@lonza.com 我们的技术专家将及时为您解答。
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