Meridian迈迪安近日全新推出了一系列无甘油NGS建库分子酶，可以实现冻干常温储运，简化运输物流，不仅减少包装材料和运输成本，而且还能减少冷链储运造成相关的碳排放，符合迈迪安坚持为体外诊断开拓可持续性创新原料的战略。
该系列酶以高浓度形式，满足了POC设备对微型化的要求。通过使用更小的反应体积量，最大化上样量的同时，确保性能的一致性，提高检测林敏度。迈迪安的新型无甘油高浓度酶进一步助力NGS研发人员设计下一代 POC NGS检测。
除此以外，迈迪安还可以为特定的 NGS 应用定制冻干试剂，根据需要提供冻干球定制服务。
T4 DNA 聚合酶 I Klenow大片段
T4 DNA 聚合酶I Klenow大片段是来自大肠杆菌DNA 聚合酶 I 的蛋白水解产物。该酶由大肠杆菌表达，表达基因的来源为polA 基因片段。
T4 DNA聚合酶I Klenow大片段酶活性：
1. 5→3DNA聚合酶活性：可以在结合有引物的单链DNA 模板上，催化将核苷酸添加到 DNA 链的 3 末端，使其沿 5 至 3 方向延伸。
2. 3→5外切酶活性：可以用于将5端突出末端补平或3端突出末端削平。T4 DNA聚合酶的3→5DNA外切酶活性对于单链DNA要比双链DNA活性更高，即单链DNA要比双链DNA中的非配对链部分更容易被T4 DNA聚合酶所消化。
3. 无5→3外切酶活性
T4 DNA聚合酶I Klenow大片段主要用于：
1. DNA 5或3突出末端的钝化
2. 5 突出端进行标记
3. 定点突变过程中第二链的合成
4. 不依赖于连接反应的PCR产物克隆
5. 通过置换反应进行标记DNA探针合成
在NGS文库制备中T4 DNA聚合酶主要作用是对DNA进行片段化处理后用于末端修复，可钝化双链 DNA 片段的 DNA 末端（填充5-overhangs 或/和去除3-overhangs ），以便随后通过 T4 DNA连接酶添加适配子。
T4 DNA聚合酶I Klenow大片段的最优反应温度是25°C或室温。75°C加热10分钟可使酶失活。金属离子螯合剂，无机焦磷酸盐(PPi)，大剂量的无机磷酸盐(Pi)均对其有抑制作用。
迈迪安的MDX208无甘油T4 DNA聚合酶I Klenow大片段提供优化的5x反应缓冲液，缓冲液中含有冻干所需的辅料，提供出色、稳定的性能。
该酶以50U/μL提供，远远高于其他同类产品（通常为5-10U/μL），高浓度分子酶适用于开发新一代POC NGS检测，以满足便携、小型化需求。
T4 DNA 聚合酶
T4 DNA 聚合酶是一种依赖 DNA模板的DNA 聚合酶，其酶活性和作用和上文介绍的T4 DNA聚合酶I Klenow 大片段一样，区别在于：
1. T4 DNA聚合酶的3→5外切酶活性比Klenow大片段要高约200倍，如此强大的外切酶活性导致该酶不适用于5突出末端的标记。
2. 最优反应温度为12°C （Klenow大片段最优反应温度是25°C）。
添加10mM EDTA或加热至75°C 10分钟可使酶失活。 金属离子螯合剂可以抑制T4 DNA聚合酶的活性。
迈迪安的MDX207无甘油T4 DNA聚合酶以10U/μL提供，并提供优化的5x反应缓冲液，缓冲液中含有冻干所需的辅料，提供出色、稳定的性能。
T4多聚核苷酸激酶
T4多聚核苷酸激酶（T4 Polynucleotide Kinase），简称T4 PNK，是一种多聚核苷酸5羟基激酶，可以催化ATP的γ位磷酸基团向单链或双链DNA、RNA、寡核苷酸或带有3磷酸基团的单核苷酸的5羟基转移。其他NTP也可产生相同的反应：5-OH + NTP → 5-P + NDP。
上述的磷酸化反应是可逆的。当缺失ATP并且存在ADP的情况下，T4 PNK可以显示出5磷酸酯酶的活性，催化单链或双链DNA、RNA、寡核苷酸或带有3磷酸基团的单核苷酸的5磷酸基团向ADP的转移形成ATP。其他NTP也可产生相同的反应：5-P + NDP → 5-OH + NTP(最适pH为6.4左右)。
当ATP和ADP都适量存在时，T4 PNK可以催化单链或双链DNA、RNA、寡核苷酸或带有3磷酸基团的单核苷酸的5磷酸基团和ATP的γ位磷酸基团之间的交换反应。其他NTP也可产生相同的反应：5-P + NTP + NDP→5-P + NDP + NTP。
T4 PNK同时具有3磷酸酯酶活性，可催化3磷酸化的多聚核苷酸的去磷酸化：3-P → 3-OH + Pi(最适pH为5.9左右)。
T4 PNK的激酶活性在C-末端附近，而磷酸酯酶活性在N-末端附近。
T4 PNK主要用于：
1. 使寡核苷酸、DNA或RNA的5端磷酸化，确保后续连接反应顺利进行
2. 催化3磷酸化的单核苷酸的5磷酸化，使该单核苷酸可以和DNA或RNA的3末端连接
3. 去除3端磷酸基团
T4 PNK的最优反应温度是37°C或室温。75℃加热10分钟或加入EDTA可使其失活。金属离子螯合剂、磷酸盐、铵根离子、大于50mM的KCl和NaCl均可显著抑制其酶活性。
迈迪安的MDX206无甘油T4 PNK以10U/μL提供，并提供优化的5x反应缓冲液，缓冲液中含有冻干所需的辅料，提供出色、稳定的性能。
T4 DNA连接酶
T4 DNA连接酶提取自T4噬菌体，是DNA重组技术中最常用的DNA连接酶之一，是研究实验室最好的酶之一，它比大肠杆菌提取的DNA连接酶具有巨大的优势。
T4 DNA连接酶可以催化粘端或平端双链DNA或RNA的5-P末端和3-OH末端之间以磷酸二酯键结合，该催化反应需ATP作为辅助因子。
T4 DNA连接酶主要用于：
1. 有效地连接钝端或黏性末端。
2. 修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交链中的单链缺口，（大肠杆菌DNA连接酶只能连接DNA-DNA分子）。
在NGS文库制备中T4 DNA聚合酶主要作用是连接双链寡核苷酸连接体或DNA适配子。
T4 DNA连接酶的最优反应温度是25°C。65℃加热10分钟可以导致T4 DNA连接酶失活。NaCl或KCl浓度大于200mM时强烈抑制T4 DNA连接酶。
迈迪安提供的MDX200无甘油T4 DNA连接酶以50 U/μL的浓度（Weiss Units）提供，比其他市售连接酶的浓度高2-10倍,其在诊断应用中具有更大的灵活性，是微流控和POC检测的理想选择。
高保真Pfu聚合酶
在NGS文库制备的过程需要使用PCR扩增，除了增加起始DNA量外，可用于对NGS文库的富集，这些两端连接有接头的片段将附着在流动槽上并进行测序，因此PCR扩增步骤不会向NGS文库引入突变对高质量的测序至关重要。因为较低的错误率意味着需要较少的序列覆盖范围，从而节省费用和时间。普通的Taq聚合酶由于缺乏校对活性，不适合用于NGS文库扩增，而高保真酶由于具有3?→5? 核酸外切酶活性，是用于NGS文库扩增的理想选择。
Pfu是一种热稳定性高保真DNA聚合酶，从激烈火球菌中分离出来。Pfu 聚合酶在镁存在的情况下以 5?→3? 方向复制 DNA，但也具有 3?→5? 核酸外切酶（校对）活性。通过这种校对活动，可以快速消除聚合过程中可能发生的碱基错误掺入。高保真Pfu酶的错误率为3.0x10-6，可生成长度长达5kb的平端扩增子。
迈迪安的MDX203高保真Pfu聚合酶以20U/μL的高浓度提供，并搭配优化的5x反应缓冲液，可提供出色、稳定的性能，适用于开发新一代POC NGS检测，以满足便携、小型化需求。
迈迪安NGS建库全面解决方案
Meridian
致力于提供优质可靠的分子原料
Meridian迈迪安致力于提供最高质量的分子原料酶制剂，全球研发生产基地均通过了 ISO 13485认证。我们始终坚持以客户为中心，以高质量的服务和产品为合作伙伴提供价值。
迈迪安产品主要优势包括：
一致性：单批次量产，保证可靠的检测
优质性能：通过严格质控，减少批间差及污染
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北京迈迪安生物科技有限公司是Meridian Bioscience在中国设立的全资子公司。Meridian BioScience （以下简称：迈迪安）是一家全球领先的生物诊断公司，总部设立在美国，距今已有47年的历史。迈迪安公司分为诊断和生命科学两个部分，在中国地区的主营业务是生命科学产品，包括各种分子和免疫诊断检测的关键原料，如抗原抗体、免疫阻断剂、PCR和LAMP反应的聚合酶和优化的预混液、核苷酸等，为人体、动物、农业、环境及食品安全等各种检测提供全面的解决方案。47年来，迈迪安已经成为全球各领域诊断企业的首选原料供应商！
摘自网址：http://www.360zhyx.com/home-research-index-rid-79608.shtml